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[사용 메뉴얼]CHIRALPAK IA,IB,IC,ID,IE,IF_RP mode
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INSTRUCTION MANUAL FOR
CHIRALPAK® IA, CHIRALPAK® IB, CHIRALPAK® IC,
CHIRALPAK® ID, CHIRALPAK® IE and CHIRALPAK® IF
<Reversed Phase>
컬럼 사용 전에 반드시 사용 설명서를 읽어 주시기 바랍니다.
본 컬럼은 normal phase 모드에서 사용 가능합니다. 상세 내용은 사용 설명서를 참조하시기 바랍니다.
RP and NP Mode 변환하기 방법
이동상을 변경할 때, 원칙적으로 상용하는 용매끼리라면 직접 치환 가능합니다. Hexane⇔Methanol, Hexane⇔Acetonitrile과 같이 혼합되지 않는 용매로 변경할 때는 일단 Ethanol로 치환한 후 목적의 용매로 치환하여 주십시오. 역상모드 사용 후 정상 모드에서는 regeneration procedure를 적용하기를 추천 드립니다. 정상 모드에서 regeneration procedure 진행하기 전에 역상 조건에서 사용한 버퍼액 및 염은 반드시 세척하여 제거하도록 합니다.
Method Development / Reversed Phase
A - Mobile Phases / For UV and Mass Detections
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ACIDIC (AMPHOTERIC) Compounds |
NEUTRAL Compounds
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BASIC Compounds ④ | |
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Aqueous solution ① |
HCOOH aq. pH 2.0 |
Water |
20mM NH4HCO3 aq. pH 9.0 adjusted with a basic additive | |
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Organic modifier② |
CH3CN or MeOH or EtOH or IPA or THF | ||||
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Typical starting conditions ③ |
Aqueous solutions 60% CH3CN 40%⑤ | ||||
F NOTE 1: 충분히 분리되지 않을 경우 하기의 다른 종류의 수용액을 사용해보십시오
B – Complementary Aqueous and Buffer Solutions / For UV Detection
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ACIDIC (AMPHOTERIC) Compounds |
NEUTRAL Compounds
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BASIC Compounds ④ | |
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CHIRALPAK® IA CHIRALPAK® ID CHIRALPAK® IE CHIRALPAK® IF CHIRALPAK® IB CHIRALPAK® IC |
Aqueous solution |
50mM Phosphate Buffer pH 2.0 OR H3PO4 aq. pH 2.0 OR 100mM KPF6 (or NaPF6) aq. pH 2.0 adjusted with H3PO4 |
Water |
20mM Borate Buffer pH 9.0 OR 20mM Phosphate Buffer pH 8.0⑥ OR 100mM KPF6 (or NaPF6) aq. |
NOTE 2: 완충용액의 농도는 500mM보다 작아야 합니다.
① Section C는 수용액 제조 방법 및 염기성 첨가에 선택에 대해 참조 할 수 있습니다.
② 분석법 개발시 우선적으로 아세토니트릴 사용을 추천드립니다.
・일반적으로 유기 용매의 용출력은 Acetonitrile, 2-Propanol, Ethanol, Methanol 순입니다.
CH3CN > EtOH > MeOH: 50%CH3CN ≈ 65-70%EtOH ≈ 75-80%MeOH
・유기 용매로써 알코올을 사용한 경우, Acetonitrile에 비해 배압이 높아지므로 주의하여 주십시오.
・칼럼 성능을 열화시킬 우려가 있으므로 표기 이외의 유기 용매를 사용하지 마십시오.
③ ・이동상은 사용하기 전에 0.5㎛ 정도의 다공질 멤브레인 필터로 여과하여 주십시오.
・이동상은 수용액과 Acetonitrile의 혼합액(조성비는 수용액/Acetonitrile=60/40(v/v)부터 검토를 시작할 것을 권장 합니다. 머무름 시간을 조절하고자 할 경우는 이동상의 조성비를 조정하여 주십시오
・칼럼의 온도를 내리면 유지시간이 길어져 분리계수가 향상되는 경우가 있습니다.
・칼럼의 온도를 올려 유속을 내리면 분리도가 향상되는 경우가 있습니다.
④ 염기성 화합물 분석시 컬럼 수명을 최대화 하기 위해서 반드시 가드 카트리지를 사용하실 것을 추천드립니다.
・실리카겔의 열화를 피하기 위해 강염기성수용액(>pH 9.0)은 사용하지 마십시오.
・pH 7.0 이상에서 사용할 때는 칼럼 온도는 25℃ 이하로 하여 주십시오.
・염기성이 매우 강한 시료는 실리카겔을 열화시킬 우려가 있습니다.
⑤유기 용매는 아래 표의 범위에서 사용할 수 있는데, 이동상의 유기 용매조성비가 높아지면 염분이 적출되어 칼럼의 막힘의 원인이 됩니다.
⑥ phosphate buffer의 경우 pH 8 이상으로 제조하여 사용하지 마십시오. pH 9가 필요한 조건이라면 ammonium bicarbonate 수용액 혹은 borate buffer를 사용하는 것이 컬럼 수명을 최대화하는 방법입니다.
C – Buffer Preparation – Examples
pH 2 KPF6 (NaPF6) solution 의 제조방법
A액: 100mM potassium (sodium) hexafluorophosphate
9.20g KPF6 / FW 184.06 or 8.40g NaPF6 / FW 167.95을 물 (HPLC 급)용해시켜 500mL 수용액이 되도록 한다.
B액: phosphoric acid (H3PO4 85% by weight)
⇒ A액에 B액을 첨가하여 pH 2.0으로 조정한다.
500ml Formic acid solution(pH 2.0)의 제조방법
⇒물(HPLC등급)에 포름산을 첨가하여 pH 2.0으로 조정한다.
H3PO4 수용액(pH 2.0)의 제조
⇒물(HPLC등급)에 H3PO4을 첨가하여 pH 2.0으로 조정한다.
50㎜ Phosphate Buffer(pH 2.0)의 제조방법
A액: 50㎜ 인산2수소칼륨 수용액
3.40g KH2PO4 / FW 136.09을 물(HPLC급)에 용해시켜 500ml의 수용액으로 한다.
B액: H3PO4 (85wt%의 H3PO4)
⇒ A액에 B액을 첨가하여 pH 2.0으로 조정한다.
20mM NH4HCO3 수용액(pH 9.0)의 제조
A액: 20mM NH4HCO3 수용액
0.79g NH4HCO3 / FW 79.06을 물(HPLC급)에 용해시켜 500ml의 수용액으로 한다.
⇒A액에 Diethylamine을 첨가하여 pH 9.0으로 조정한다.
100mM Hexafluorophosphoric acid 수용액
pH 2으로 조정한 100Mm Hexafluorophosphoric acid 수용액의 제조
A액: 100mM Hexafluorophosphoric acid 수용액
⇒9.20g KPF6 / FW184.07을 물(HPLC급)에 용해시켜 500ml의 수용액으로 한다.
B액: H3PO4 (85wt%의 H3PO4 )
⇒A액에 B액을 첨가하여 pH 2.0으로 조정한다.
20mM Phosphate Buffer(pH 8.0)의 제조방법
A액: 20mM Phosphate Buffer
1.24g H3BO3 / FW 61.83을 물(HPLC급)에 용해시켜 1L의 수용액으로 한다.
B액: 20mM Na2B4O7 수용액
3.81g Na2B4O7 10H2O / FW 381.37을 물(HPLC급)에 용해시켜 500ml의 수용액으로 한다.
⇒B액에 A액을 첨가하여 pH 8.0으로 조정한다.
Column Care / Maintenance
컬럼을 보관하거나 100% 유기용매만으로 사용하고자 할 시에는 이동상으로 사용한 버퍼를 제거한 후 사용합니다.
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